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乳腺癌类器官造就基是一款推进乳腺癌类器官体表形成和扩增的造就基。该产品为无菌的液体混合系统,含有维持主张细胞成长所必须的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及成长因子等。该造就基的怪异配方能够提供一个相宜的细胞所需营养环境,推进人乳腺癌类器官的体表成长和扩增。
使用注明
4℃避光保留1个月内有效。
1. 乳腺癌类器官造就
(1)消化后的细胞悬液进行计数。
(2)按每孔1~2×104个细胞密度推算所需细胞数,凭据推算好的体积汲取细胞悬液参与预冷的1.5 mL离心管中,离心,弃上清,将细胞沉淀置于冰上。
(3)按1:2体积比,将一份体积的含1%BSA的DMEM参与2份体积的细胞表基质胶(Corning#356231)中,轻轻混匀(全程冰上操作),而后在冰大将配好的基质胶混合液与细胞沉淀充分混匀。
(4)将细胞沉淀与基质胶的混合液依照35 μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中央,使之形成圆顶状胶滴�;郝赴炀桶逡浦猎炀拖渲辽�30 min。
(5)待基质胶齐全凝固,沿24孔壁缓慢参与1 mL/孔预先复原至室温的本类器官造就基,并将造就板置于37℃,5%CO2前提下静置造就。
(6)镜下观察类器官形成情况,每3~4天更换一次造就基。
2. 乳腺癌类器官的网络
(1)弃造就基,每孔参与1 mL预冷的无血清DMEM:F12造就基并用该造就基润洗枪头,反复奏乐至圆顶状胶滴齐全脱离板底,将孔内吹散后的类器官混合液网络至15 mL离心管中。沉复操作一次。将两次洗脱下来的类器官混合液归并网络至统一离心管中,1500 rpm离心5 min,轻轻吸去上清和基质胶层,沉淀待用。
(2)沉淀参与3-5 mL类器官解离试剂(PRS-ODR),37℃,200 rpm水平摇床上解离10 min(具体解离功夫凭据类器官大幼和数量决定,以肉眼可见颗粒显著减幼一半为准,可中途取解离的类器官显微镜下观察,类器官解离至均匀蕴含有5~10个细胞的细胞团块大幼最佳)。
(3)解离实现后参与和解离试剂等体积的含10%FBS的DMEM稀释。1500 rpm离心3 min,弃上清,待用。
3. 乳腺癌类器官传代
(1)网络好的细胞沉淀(以无肉眼可见基质胶状沉淀为准)参与1~2 mL预冷的含1%BSA的DMEM造就基沉悬,在4℃下,1500 rpm,离心5 min。
(2)幼心吸弃上清,沉淀用乳腺癌类器官造就基沉悬计数。
(3)依照步骤3(2)~(6)的操作,以约莫1000个类器官/孔密度沉新接种类器官,并持续扩大造就。
有关产品
货号: PRS-BCM-2D
货号: PRS-BCM-CR
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