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造就基
产品注明
肺癌前提沉编程造就基是一种为推进肺癌原代细胞体表成长而设计的造就基 。它是一种无菌的液体混合系统，含有必须和非必须的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、成长因子、微量矿物质等 。该造就基产品基于碳酸氢盐的缓冲系统，在5% CO2/95%空气的造就箱中平衡时，pH值为7.4 。该造就基的配方能够提供一个相宜的平衡的营养环境，选择性地推进体表人肺癌原代细胞的成长 。
使用注明
2~8℃避光保留2个月内有效 。
1. 肺癌原代细胞造就
初次分离的肺癌幼样本(如穿刺样本)细胞悬液通常无需计数，直接种入12孔板中；肺癌术中样本过70微米筛网后计数，依照说明书中细胞数接种在相宜的造就器皿中，参与γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(增长滋养细胞数量详见说明书)，原代细胞初次接种后2-3 天勿动(利于细胞贴壁)，造就过程中若造就基色彩变黄但细胞未长满时可换半液，镜下观察细胞未长满但NIH-3T3细胞已不实时，适量补充γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(通常补加初始数主张一半) 。
2. 肺癌原代细胞传代
镜下观察细胞形成克隆，且聚合度80~90%时即可传代；造就箱中取出细胞，弃旧造就液，0.25%胰酶洗涤30秒后吸尽，再参与适量0.05%胰酶，37℃孵育，5 min后拿出轻拍造就瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况；细胞消化至细胞变圆并起头脱落时用原代细胞终止造就基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm离心3 min；弃上清，以1-2 mL肺癌原代细胞造就基沉悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于造就瓶/板中，参与γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(分歧规格造就瓶/板底面积、接种原代细胞数量、增长滋养细胞数量详见说明书)，补加肺癌原代细胞造就基至所需体积，轻轻摇摆混匀，表表消毒后置造就箱，37 ℃ 、5 % CO2前提造就 。其他步骤同上 。
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